化學名：線性聚乙烯亞胺，線性 PEI，聚乙烯亞胺，線性，MW 25000，

轉染級

CAS＃： 9002-98-6,26913-06-4

分子式 （CH2CH2NH）n

分子量： 25,000

規格：100mg 500mg 5g

熔點： 73-75o

溶于：熱水，低 pH 冷水，甲醇和乙醇。不溶于：苯，乙醚和丙酮外觀：

白色至黃色固體

處理：手套和通風櫥

分子量：25KD

儲存： PEI 內含自由氨基，建議開封后 4℃干燥保存，減緩氧化過程。

配置：

1：稱取 100mg 線性聚乙烯亞胺，加新鮮

的細胞級別的水 90ml，加鹽酸至 PH=3 左

右， 加熱至 80℃左右攪拌過夜溶解 PEI，

2：用氫氧化鈉溶液調整 pH 值至 7.0 ，定

容至 100ml，用 0.22um 的濾器過濾，分

裝后儲存于 4℃，保質期可以達到 12 個月。

轉染操作流程 (穩定轉染方法)

1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細

胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔置

入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升

至室溫。依據表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培

養基稀釋適量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線

性 PEI 轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批 DNA 比例可

能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉染

試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min

以形成 DNA-PEI 復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL

/14 mL 離心管。

3. 轉染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在

無血清條件下轉染時，去除生長培養基，替換成無血清培養基，然后滴 DNA-PEI 復合

物。轉染 3 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長培養基。

4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2 培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染

后最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。

5.轉染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在

CO2 培養箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約

1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。

特別提醒

1 .PEI 25K 含有 4-11％的殘留丙?；?，這可能阻礙聚合物主鏈與 DNA 的有效

結合，所以批間轉染效率可能會有比較大的差異，建議一個批次可以多購買，PEI

25K 穩定性在室溫干燥避光下可穩定保存 10 年以上（雖然有效期標注只有 18

個月左右）。

2. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞，在

轉染前兩天鋪板，可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，

可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為 70~80%。

3. 對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。

4. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI 復合物仍能轉染

細胞，但是 DNA-PEI 復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用

Opti-MEM ITM 培養基以達到最佳轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與

線性 PEI 轉染試劑的兼容性。

5. 對大多數細胞來而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI 轉染試劑都能獲得較

高轉染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 體積線性 PEI。

Polyethylenimine, Linear (MW 25,000)為 BIOHUB 公司生產的

化合物產品，每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都

100%合格、穩定且高品質,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實

驗室因素(配置方法，PH,水純度,稱量的準度,dna RNA 純度,細胞狀

態，細胞品系…)造成溶解出現問題或者轉染效率出現差異,所以廠家

只受理該產品純度，分子量及重量缺失破損等相關投訴，針對極個別

客戶溶解問題和轉染效率問題我們只能友善解決,所以不能保證您能

獲得滿意答復，對于產品產品轉染效率不高，轉染批間有差異，轉染

不了等問題，不作為評價我們售后工作的依據。

本手冊只是一個基本操作手冊，具體轉染過程中需要根據實驗進行

優化，優化方向為混合時間，轉染時間，DNA 混合比例.......

? 如果我們提供的 PEI 手冊都無法解答您的問題,建議您可以多看文

獻,多調整一下轉染條件,找出適合自己細胞的轉染方法。如果無暇

摸索條件,您也可以直接購買我們配置好細胞轉染液,這樣免去您很

您很多煩惱,謝謝理解。

轉染操作流程：(瞬時轉染方法) 轉染效率（部分數據參考，本數據來源于網絡，不作為售后投訴依據）

1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細

胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔置

入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其

升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養基稀釋適

量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性 PEI 轉

染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉染試劑滴

加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以

形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14

mL 離心管。

3. 轉染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在

無血清條件下轉染時，去除生長培養基，替換成無血清培養基，然后滴 DNA-PEI 復

合物。轉染 3 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長培養基。

4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2 培養箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉

染后最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定最適合檢測時間。

細胞種類 中文名稱 PEI 轉染效率

HEK293 人胚腎細胞 90%-95%

293-T 人胚腎細胞 90%-95%

CHO-K1 倉鼠卵巢細胞 80%-90%

U251 人源神經膠質瘤細胞 80%-90%

Hela 人源宮頸癌細胞 70%-80%

COS7 猴 SV40 轉化腎細胞 70%-80%

HepG2 人源肝癌細胞 70%-80%

NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細胞 60%-70%

膠質瘤干細胞 人源膠質瘤干細胞 60%-70%

Patu8988 人源胰腺癌細胞 60%-70%